色譜柱的兩大維護(hù)方法

一、正確使用緩沖鹽
緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑，因此緩沖鹽使用不當(dāng)會使其析出，堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙，使填料板結(jié)，柱壓上升；同時(shí)阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展，使色譜柱的保留能力下降，柱效降低。緩沖鹽析出后，去除非常困難，因此，正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱使用壽命非常重要。
正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出，因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結(jié)為一句話：使用前要過濾，使用后要沖洗。具體方法如下：
1、等度條件：使用緩沖鹽前和使用后需用過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min；使用后去除緩沖鹽的另一個方法是用過渡流動相以0.2ml/min流速沖洗色譜柱。
2、梯度條件：用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前，用與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min，再用該過渡流動相以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動相的梯度設(shè)定應(yīng)盡量平緩，以避免梯度過程中緩沖鹽析出。
注意：過渡流動相是指有機(jī)相和水相的組成與分析流動相相同，區(qū)別只是過渡流動相不含緩沖鹽。
3、緩沖鹽析出的補(bǔ)救方法：
1）方案1：用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min
2）方案2：用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱。

二、防止強(qiáng)保留物質(zhì)在色譜柱上存留
強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積，對樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為，不僅引起峰型變寬、拖尾，使柱效下降，同時(shí)也會引起保留時(shí)間的變化，累積到一定程度時(shí)還會導(dǎo)致柱壓升高。由于強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物對色譜分離的影響是一個累積效應(yīng)，需要一定的時(shí)間才會體現(xiàn)出來，但對許多藥品特別是復(fù)雜樣品而言，很難判斷其是否是含有強(qiáng)保留物質(zhì)，因此要防止強(qiáng)保留物質(zhì)的累積，需要在每天的日常維護(hù)中用純甲醇或乙氰清洗色譜柱。 clin-lab.com
清洗方法：
1、未使用緩沖鹽：每天分析完成后，先用上述方法除去緩沖鹽，然后再用甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min。
2、使用過緩沖鹽：分析完成后，先用上述方法除去緩沖鹽，然后在用純甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min
3、補(bǔ)救方法：
水——乙氰——氯仿（或異丙醇）——乙氰——水
每一步以1.0ml/min流速反向沖洗色譜柱60min。